Клонирование
Страница 6

Выход морул или бластоцист в серии опытов с культурой клеток молочной железы был примерно втрое меньше, чем в двух других сериях, когда в качестве доноров ядер использовали культуру фибробластов плода или эмбриональных клеток. Число живых ягнят в сравнении с числом пересаженных в матку окончательного реципиента морул или бластоцист было также в два раза ниже. В серии опытов с клетками молочной железы из 277 реконструированных яйцеклеток был получен только один живой ягненок, что говорит об очень низкой результативности такого рода экспериментов (0,36%). Анализ генетических маркеров всех семи родившихся в трех сериях экспериментов живых детенышей показал, что клетки молочной железы были донорами ядер для одного, фибробласты плода - для двух и эмбриональные клетки - четырех ягнят. Овца по кличке Долли развилась из реконструированной яйцеклетки, донором ядра которой была культивируемая клетка молочной железы овцы породы финн дорсет и фенотипически не отличается от овец этой породы, но сильно отличается от овцы-реципиента . Анализ генетических маркеров подтвердил этот результат.

Методика Клонирования в СССР.

Специалисты по клеточной биологии академик РАМН Геннадий Сухих и член-корреспондент РАМН Вадим Репин в книге "Медицинская клеточная биология" пишут: "Схема эксперимента выглядела следующим образом. Донорские клетки выделяли из эпителия молочной железы сукотной шестилетней овцы породы Finn Dorset. Клетки эпителия молочной железы выращивали в "бедной" питательной среде (содержащей в 5 раз меньше концентрации всех компонентов). В этих неблагоприятных условиях ядра дифференцированных клеток <…> полностью переходили в неактивное состояние <…>. Этот способ репрограммирования ДНК соматических клеток в дефицитной питательной среде был первым важным открытием шотландских ученых.

С помощью суперовуляции получали десятки неоплодотворенных яйцеклеток овцы породы Scottish Blackface. Из яйцеклеток с помощью микроманипулятора удаляли пронуклеус. Яйцеклетку без ядра и эпителиальную "голодную" клетку присасывали к концу микропипетки. Когда две клетки образовывали плотный контакт, пропускали электрический разряд. Первый электроразряд применялся для слияния двух клеток. Второй электрозаряд был необходим для запуска <…> дробления клетки. Использование электрического разряда для слияния и запуска развития было вторым важным методическим новшеством лаборатории. (Авторы получили патент на метод слияния и клонирования химерных искусственных зародышевых клеток.)"

Однако, как выясняется сейчас, действительно высококлассный эксперимент шотландских ученых был отнюдь не первым. Первой была работа советских исследователей Чайлахяна Л.М, Вепренцева Б.Н., Свиридовой Т.А., Никитина В.А. Результаты их экспериментов были опубликованы в солидном советском академическом журнале "Биофизика" (том ХХХII, вып. 5, 1987). Подробнейшая, на тринадцати страницах, я бы сказал - классическая статья, так и называлась: "Электростимулируемое слияние клеток в клеточной инженерии". "Статья посвящена обзору работ по реконструкции животных и растительных клеток, в которых используется новый физический метод - электростимулируемое слияние. Обсуждается влияние различных факторов среды на эффективность электрослияния. Подробно описываются собственные исследования авторов по реконструкции мышиных зигот сочетанием микрохирургии и электростимулируемого слияния клеток", - говорится в резюме этой статьи. Авторы - сотрудники Института проблем передачи информации АН СССР (Москва), Института биологической физики АН СССР (Пущино) и ВНИИ физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных ВАСХНИЛ (Боровск) - скрупулезно приводят методику экспериментов (конструкции микропипеток, которыми извлекали из клеток ядра; конструкции электродов, через которые подавались импульсы тока и т.п.).

Страницы: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13